课程简介
自从RNA被发现在基因组和蛋白组之间作为关键的调控和中间媒介后,转录本的鉴定和基因表达定量就成为分子生物学中的研究热点,而利用高通量RNA测序,能够很好地帮助人们进行这两项研究。
然而近年来越来越多的方法学和分析流程的被公开发表与应用,让很多初学者感到迷茫与困惑,尤其是如何理解RNA-Seq研究的必要和关键步骤。由于研究目的千差万别,目前没有一个分析流程能够适用于所有的项目。
本次专题分为Section 1和Section 2,将会带大家回顾RNA-Seq数据分析中的主要步骤,包括实验设计,数据质控,数据比对,基因和转录本定量,数据可视化,基因差异表达,可变剪接,功能分析,融合基因检测和eQTL检测等等。同时,我们将会针对每一步分析中的难点与挑战,一起探讨新技术可能带来的转录组研究的革新。
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课程大纲
01/ 实验设计
哪些生物学问题适合以转录组为研究对象?
HiSeq 2000/2500/4000,Ion Proton/PGM,BGISEQ-500,PacBio RSII/Sequel这些测序平台如何选择?
测序长度是不是越长越好?测序量是不是越大越好?
在项目预算有限的情况下,如何分配测序深度与生物学重复的关系?
02/ 数据比对
Bowtie,SOAP,BWA,TopHat,Hisat,GMAP这些比对软件有什么区别?该如何选择?
比对率在多少算是正常?比对率低一般是什么原因?
有比对的结果可以做哪些分析?
03/ 基因定量
我的项目研究对象是人/小鼠/水稻等模式生物,研究对象只有转录组组装的结果,或者只有基因组组装的结果,怎么选择基因定量方法?
RPKM和FPKKM分别代表什么意思?
我们该关注高表达基因还是低表达基因?
高通量测序得到的结果是否需要qPCR验证?如何选取基因验证?
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课程对象
01/ 如果你有临床/生物/基因组方向或者其他相关专业背景,希望通过高通量测序回答生物学问题...
02/ 或者你正准备开始转录组数据的生物信息分析,却不知道如何入手;又或者你对转录组分析内容感兴趣的话...
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讲师介绍
袁永娴
袁永娴,华大RNA方向研发负责人,主要研究方向为基因表达定量,可变剪接与融合基因的鉴定,长链非编码RNA的预测与功能分析,新平台与新技术在RNA方向的应用。